Detection of bovine foetal DNA from amniotic fluid using the polymerase chain reaction

Sikiövedestä tehtävä diagnostiikka on tullut nopeammaksi ja tehokkaammaksi viime vuosikymmenellä keksityn polymeraasiketjureaktion (PCR) myötä. DNA:n voi nyt analysoida suoraan aspiroidusta sikiövesinäytteestä ilman soluviljelyä. Ihmislääketieteessä PCR:ään perustuva sikiövesidiagnostiikka on ollut käytössä jo useiden vuosien ajan. Valmius myös naudan perinnöllisten sairauksien ja taudinaiheuttajien toteamiseksi on jo olemassa, mutta menetelmiä ei ole vielä otettu yleisesti tähän käyttöön. Tässä kokeessa haluttiin selvittää, kuinka pienestä sikiövesinäytteestä sukupuolenmääritys voidaan luotettavasti tehdä, ja miten näyte on puhdistettava analyysiä varten. Tutkimusta varten teurastamolta haettiin 10 kohtua 70-120 päivän ikäisine sikiöineen. Laboratoriossa kerättiin näytteet sikiövedestä, sikiöstä ja kohdusta. Sikiövedestä määritettiin sukupuoli ja kappakaseiini -tyyppi, jotta näytteen voitiin osoittaa sisältävän sikiön soluja. Jos emän ja sikiön välillä ei ollut kummassakaan em. analyysissä eroa, tehtiin vielä mikrosatelliitteihin eli DNA:n toistojaksoihin perustuva analyysi. Mikrosatelliitteja esiintyy läpi koko genomin ja kunkin mikrosatelliittilokuksen muuntelu eri yksilöiden välillä on suurta, joten niiden joukosta on mahdollista valita sellaiset, joiden "sormenjäljet" ovat yksilölliset. Kaikista sikiövesinäytteistä saatiin sama signaali kuin itse sikiöstä ja nämä molemmat poikkesivat emän signaalista. Kahdesta puhdistetusta sikiövesinäytteestä katosi soluaines puhdistuksen aikana, joten on yksinkertaisempaa ja turvallisempaa jättää näyte puhdistamatta, koska analyysin onnistuminen ei siitä vaarannu. Tutkimuksen perusteella voidaan todeta, että kehittyvän sikiön sukupuoli ja tarvittaessa muitakin DNA-tasolla näkyviä ominaisuuksia voidaan luotettavasti määrittää suoraan 0,5-1,5 ml:stä sikiövettä ilman edeltävää soluviljelyä tai DNA:n puhdistusta.