A mouse model for improving cell survival of bisected cattle embryos

Abstract

Morula- ja blastokystivaiheessa olevia hiiren alkioita halkaistiin mikroterällä M2-liuoksessa. Halkaisukokeessa tutkittiin sakkaroosin (200 mM) ja sytokalasiinin (7,5 ug/ml) vaikutusta solujen kestävyyteen kaksoisvärjäyksen avulla. Värjäyksen jälkeen solut voidaan erottaa toisistaan fluoresenssimikroskoopin avulla värin perusteella. Hoechst 33258-väri värjää kaikki solut (sininen fluoresenssi), ja propidiumjodi vain tuhoutuneet solut (vaaleanpunainen fluoresenssi). Morulavaiheessa olevia alkioita halkaistaessa sytokalasiini vähensi hajonneiden solujen osuutta riippumatta siitä, oliko liuoksessa myös sakkaroosia. Kun käytettiin blastokystivaiheessa olevia alkioita, eri käsittelyillä ei havaittu vaikutusta hajonneiden solujen määriin. Sakkaroosilla ei ollut vaikutusta blastokystivaiheen solujen kestävyyteen. Nämä tulokset ovat samansuuntaisia kuin vastaavasta naudan alkioilla tehdystä kokeesta saadut tulokset. Halkaisussa tuhoutuneiden solujen erottaminen on hiiren alkiolla helpompaa kuin naudan alkioilla. Edullisena ja yksinkertaisena hiirimalli voi olla hyödyllinen kehitettäessä naudan alkion soluja paremmin suojaavia mikrokirurgisia menetelmiä.

Morula and blastocyst stage embryos recovered from B6D2F 1 mice were bisected with a metal microlabde in M2 medium with or without sucrose and/or cytochalasin B supplementation. Cell lysis was determined by staining the embryos with Hoechst 33258 and propidium iodide. Lysed cells take up both stains but non-lysed cells only the Hoechst 33258 stain, resulting in pink fluorescence for lysed cells and blue fluorescence for non-lysed cells under UV excitation. During bisection of morulae, the presence of cytochalasin B decreased the proportion of lysed cells in both the absence (P=0.0001) and presence of sucrose (P=0.001). During bisection of blastocysts the average proportion of lysed cells was slightly lower in the presence of cytochalasin than that in the control medium, but the effect was not statistically significant (P=0.34). No effect of sucrose was observed in either demi-morulae or demi-blastocysts. These results are essentially similar to those obtained in simultaneous experiments with cattle embryos, suggesting that the simpler mouse model might be useful for developing less traumatic bisection protocols for cattle embryos.