In vitro production of cattle blastocysts in chemically defined medium with or without insulin supplementation

Abstract

Naudan alkion varhaiskehitystä tutkittiin viljelemällä alkioita kemiallisesti tunnetussa viljelyliuoksessa. Kokeessa käytetty liuos CR1-PVP on muunnos CR1aa-liuoksesta, jonka proteiinilähde, naudan seerumin albumiini, korvattiin 4mg/ml polyvinyylipyrrolidonilla. Kokeessa käytetyt kolme insuliinipitoisuutta olivat 0, 2 ja 200 nM. In vitro-tuotetut alkiot jaettiin hedelmöityksen jälkeen kolmeen viljelyryhmään: CR1-PVP, CR1- PVP + insuliini (2 nM) ja CR1-PVP + insuliini (200 nM). Alkioita viljeltiin seitsemän päivää, ja neljäntenä päivänä lisättiin tuoretta viljelyliuosta ja glukoosia (lopullinen pitoisuus 5,56 mM). Viljelyn päättyessä alkiot arvioitiin kehitysvaiheen mukaan ja alkioiden solut laskettiin tumavärjäyksen jälkeen. Proteiinittomassa viljelyliuoksessa saatiin blastokysteiksi kehittymään 8,7 %. Insuliinin lisäyksellä saatiin enemmän blastokystejä (12,8 %), mutta ei tilastollisesti merkitsevästi. Jakautumisprosentti, blastokystien osuus jakautuneista alkioista sekä morula/ blastokystivaiheen alkioiden tumalukumäärä (P=0,10) olivat korkeimmat ryhmässä, jossa insuliinipitoisuus oli 200 nM.

In this study we evaluated the use of a chemically defined medium in the production of blastocysts from bovine oocytes fertilized in vitro. As culture medium we used CR1-PVP, a modification of CR1aa medium with bovine serum albumin replaced by polyvinylpyrrolidone. After 168 h of culture (192 h after insemination) 8.7%, 10.5 and 12.8% of the cleaved embryos developed to the blastocyst stage in the presence of 0, 2 or 200 nM insulin, respectively. The supplementation of 200 nM insulin tended to increase cell numbers in morulae and blastocysts (P=0.10). It is concluded that CR1-PVP can be used as a chemically defined medium in the production of blastocysts from bovine 1-cell embryos. However, further modifications are needed, and the insulin concentrations used may be below the optimum for blastocyst production.