A simple culture system for time-lapse video recording of bovine embryos

Aikaviivenauhoituksen avulla naudan alkionviljelyä voidaan seurata yhtäjaksoisesti optimiolosuhteissa, joissa lämpötila ja kaasukehä pysyvät vakioina ja alkiot eivät altistu valon lyhyille aallonpituuksille. Mikroskoopin ympärille on yleensä rakennettu pieni viljelykaappi, minkä takia menetelmä on ollut kallis ja työläs. Tässä kokeessa alkioita viljeltiin tavallisessa soluviljelypullossa, joka peitettiin mustalla teipillä pientä päällä olevaa ikkunaa lukuunottamatta. Pullon sisään luotiin kaasukehä siten, että pulloa pidettiin viljelykaapissa kaksi tuntia sekä ennen alkioiden pulloon siirtämistä että siirtämisen jälkeen. Pullo suljettiin tiukasti ja viljely aikaviivenauhoitettiin ikkunan päälle asetetun punaisen suodattimen läpi. Viljelypullo asetettiin käänteismikroskoopin alle lämpölevylle, jonka lämpötila oli esikokeissa säädetty siten, että viljelypisaran lämpötila oli 39°C. Kokeessa tehtiin 10 toistoa. Niissä verrattiin aikaviivenauhoitettujen ja samanaikaisesti viljelykaapissa kasvaneiden kontrollialkioiden solulukumääriä 24 tunnin viljelyn jälkeen. Tulokset analysoitiin T-testillä yhdistämällä toistojen aineistot neliöjuurimuunnoksen jälkeen. Aikaviivenauhoitettujen ja inkubaattorissa kasvaneiden alkioiden välillä ei ollut eroa 24 h viljelyn jälkeen (p=0.95), joten kehittämämme menetelmä soveltuu ilmeisesti hyvin naudan alkioiden varhaisvaiheiden seurantaan.