Effect of glycine and alanine supplementation on development of cattle embryos cultured in CR1aa medium with or without cumulus cells

Glysiinin (10 mM) ja alaniinin (1 mM) vaikutusta naudan alkion varhaiskehitykselle tutkittiin kolmessa viljelykokeessa. Kumulussoluttomia alkioita viljeltiin hedelmöityksen jälkeen CR1aa-liuoksessa, johon oli lisätty glysiiniä (koe 1) ja alaniinia (koe 2). Kokeessa 3 käytettiin alkioita, joista ei poistettu kumulussoluja ja ne jaettiin neljään eri viljelyliuokseen: CR1aa + glysiini (10 mM), CR1aa + alaniini (1 mM), CR1aa + glysiini + alaniini sekä kontrolliliuos, joka oli kaikissa kokeissa CR1aa. Alkioita viljeltiin yhteensä kuusi päivää. Neljäntenä päivänä viljelytippoihin lisättiin tuoretta viljelyliuosta ja glukoosia (lopullinen pitoisuus 5,56 mM). Viljelyn päätyttyä alkiot luokiteltiin kehitysvaiheen mukaisesti ja niiden solujen lukumäärä laskettiin värjäämällä fiksoitujen alkioiden tumat Hoechst-värillä. Kokeessa 1 glysiinin lisäyksellä ei ollut vaikutusta alkioiden kehittymiseen morula/blastokystivaiheeseen. Morula/blastokystialkioiden solujen lukumäärä oli kuitenkin merkitsevästi korkeampi glysiiniryhmässä (69,5) kuin kontrolliryhmässä (53,3). Kokeessa 2 alaniinilla ei todettu merkitsevää vaikutusta morula/blastokystien määrään, mutta morula/ blastokystivaiheen alkioiden solujen lukumäärä oli merkitsevästi alhaisempi alaniiniryhmässä (34,4) kuin kontrolliryhmässä (68,7). Kumulussolullisia alkioita viljeltäessä (koe 3) aminohappojen lisäyksellä ei havaittu vaikutusta solujen lukumääriin. Sen sijaan morula/blastokystivaiheen alkioita saatiin kontrolliryhmään verrattuna merkitsevästi enemmän kun viljelyliuokseen lisättiin sekä glysiiniä että alaniinia.