Mapping antigenic epitopes of potato virus Y with antibodies affinity-purified by using overlapping synthetic peptides

Abstract

Työssä syntetisoitiin limittäisten heksapeptidien sarja, joka kattoi perunavirus Y:n (PVY) kapsidiproteiinin koko aminohapposekvenssin. Peptidien avulla affiniteettipuhdistettiin anti-PVY vasta-aineita polyklonaalisista anti-PVY antiseerumeista, ja vasta-aineiden sitoutuminen PVY- partikkeleihin tutkittiin entsyymi-immunoassaymenetelmillä. Näin saatiin identifioitua PVY:N kapsidiproteiinin antigeenisia alueita, joita löydettiin erityisesti kapsidiproteiinin polypeptidiketjun päistä. Vertailu menetelmään, jossa mitattiin anti-PVY-vasta-aineiden sitoutumista ko. peptidisarjan peptideihin, paljasti useita eroavaisuuksia. Tulokset osoittavat, että luotettavan epitooppikartan saamiseksi on tutkittava sekä vasta-aineiden sitoutumista peptideihin että peptideistä eluoitujen vasta-aineiden sitoutumista virusantigeeniin. Saadut tutkimustulokset auttavat synteettisiin peptideihin perustuvien määritysmenetelmien kehittämisessä kasviviruksille.

Synthetic, overlapping peptides representing the entire amino acid sequence of potato virus Y (PVY) coat protein were used to affinity-purify antibodies from polyclonal antisera to PVY. In testing the binding of the purified antibodies to PVY particles, antigenic epitopes were identified. The N-terminal and C-terminal regions of the PVY coat protein were found to contain most of the antigenic epitopes. The results will facilitate the development of detection methods for PVY based on synthetic peptides.