In vitro pollen culture and the regeneration of Brassica campestris L. plants

Tutkimus sisälsi 28 perimältään erilaista kevätrypsilinjaa ja -lajiketta. Tutkimusmateriaali kasvatettiin alkuvaiheessa kasvihuoneessa ja siirrettiin ennen kukintaa kasvatuskammioon. Mikrosporiviljelyssä parhaan tuloksen tuottivat mikrosporit eli epäkypsät siitepölyhiukkaset, joiden kehitysvaihe oli myöhäinen 1-tumavaihe, mikä edellyttää, että kukkasilmun pituus on 2-4 mm. Oikeassa kehitysvaiheessa olevat kukkasilmut murskattiin B5-nestealustalla ja mikrosporit viljeltiin NLN-nestealustalla, ensin 72 h ajan +32°C:ssa ja seuraavaksi kolme viikkoa +25°C:ssa. Viljellyistä mikrosporeista alkioita tuotti yhdeksäntoista kevätrypsigenotyyppiä. Parhaalla genotyypillä saatiin 100 mikrosporista 300 alkiota. Aktiivihiili 150 mg/l paransi mikrosporien kehitystä ja lakionmuodostusta sekä lisäsi alkioiden lukumäärää. Alkiot kasvatettiin vihreiksi kasveiksi kiinteällä B5-alustalla. Tutkimuksen ensimmäinen vaihe tuotti noin 100 haploidista kevätrypsikasvia.