Time saving method for protoplast isolation, transformation and transient gene expression assay in barley
Agricultural Research Centre of Finland|The Scientific Agricultural Society of Finland|Agricultural Research Centre of Finland|The Scientific Agricultural Society of Finland
1994
Tätä artikkelia/julkaisua ei ole tallennettu Jukuriin. Julkaisun tiedoissa voi kuitenkin olla linkki toisaalle tallennettuun artikkeliin/julkaisuun.
Pysyvä osoite
URI
Tiivistelmä
Tutkimuksessa kehitettiin menetelmä, jossa protoplasteja eristetään suoraan ohran jyvien alkion ja sirkkakilven solukosta ilman edeltävää solukkoviljelyvaihetta. Jyvät pintasteriloitiin ja niitä liuotettiin steriloidussa vedessä vuorokausi. Tämän jälkeen alkion ja sirkkakilven solukot eristettiin jyvistä ja pilkottiin pieniksi paloiksi. Protoplastien eristämiseksi kokeiltiin aluksi kolmea erilaista entsyymiIiuosta, joista paras valittiin PEG (polyetyleeniglykoli) menetelmällä tehtyihin geeninsiirtokokeisiin. Siirtokokeissa käytetty rengasmainen plasmidi-DNA pAct1-F sisälsi riisin Act1-säätelyjakson, Gus-geenin (koodaa ß-glukuronidaasi-entsyymiä) ja Nos-lopetusjakson. PEG-käsittelyn jälkeen protoplasteja kasvatettiin KPR-kasvatusalustalla. Transienttinen (väliaikainen) Gus-geenin ilmentyminen määritettiin vuorokauden kuluttua käsittelemällä transformoituja protoplasteja X-gluc-entsyymisubstraatilla. Enimmillään noin kuudessa prosentissa transformoiduista protoplasteista havaittiin Gus-geenin ilmentymistä. Tulosten mukaan tämä nopea protoplastien eristystekniikka soveltuu erityisesti väliaikaisen geeni-ilmentymisen tutkimukseen, sillä ajansäästö protoplastien normaaliin suspensioviljelmään verrattuna on huomattava.
ISBN
OKM-julkaisutyyppi
A1 Alkuperäisartikkeli tieteellisessä aikakauslehdessä
Julkaisusarja
Agricultural Science in Finland
Volyymi
3
Numero
2
Sivut
Sivut
199-205
ISSN
0789-600X